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Purification of Proteins from Inclusion Bodies

1、将菌体用30-35 ml PBST 悬浮；
2、冰浴超声：300W, 2s, 2s, 6 min;
3、破碎后离心：12000rpm，15 min，4℃；
4、将沉淀用30 ml wash buffer重悬，添加200 ul (100 mM)PMSF ,60 ul (2 M)DTT;
5、冰浴超声：300 W, 2s, 2s, 3min；
6、室温振荡洗涤1h；
7、离心：10000 rpm, 10 min，4℃；
8、沉淀再用15ml wash buffer 重悬，冰浴超声：300W,2s,2s,1min；
9、室温振荡洗涤1h；
10、用10ml的 EP管离心：10000rpm,10min，4℃；
11、沉淀用纯水清洗。
12、根据蛋白用途，再加入适当体积的溶解液，重悬沉淀，4℃振荡过夜溶解：
注射用：8M Urea pH 8.0
纯化用：2% SKL pH 8.0
13、次日离心：10000rpm,10min，4℃，制样跑胶。

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