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详细内容

FC技术

FC


流式细胞技术( Flow Cytometry, FC)是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒(如微球、细菌、小型模式生物等)逐个进行快速定量分析和分选的技术。 

 细胞胞内染色操作流程

1.制备单细胞悬液;

2.PBS洗涤两次后加入固定剂;
(1)靶标在胞内时加入4%PFA固定10-20分钟后,用Flow Cytometry Perm Buffer洗涤1-2次(每次5分钟,400-600g);
(2)靶标在核时加入Transcription Factor Staining Buffers。(固定30-60分钟,洗涤1-2次,每次5分钟,400-600g);

3.洗涤之后加入对应的缓冲液,重悬细胞静置10分钟;

4.[可选]阻断Fc受体(10-20分钟);

5.加入抗体,2-8°C孵育(30分钟);

6.用对应的缓冲液洗涤1-2次(每次5分钟,400-600g);

7.如非荧光染料直标抗体加入荧光二抗,2-8°C孵育(30分钟);

8.用对应的缓冲液洗涤1-2次(每次5分钟,400-600g);

9.[可选]细胞活性染料染色细胞;

10.用对应的缓冲液(或PBS)重悬细胞;

11.利用流式细胞仪分析细胞。

细胞表面染色操作流程

1.制备单细胞悬液;

2.[可选]阻断Fc受体(10-20分钟);

3.加入抗体,2-8°C孵育(30分钟);

4.用流式细胞染色缓冲液(或PBS)洗涤(1-2x5分钟,350g);

5.如非荧光染料直标抗体加入荧光二抗,2-8°C孵育(30分钟);

6.用流式细胞染色缓冲液洗涤(1-2x5分钟,350g);

7.[可选]细胞活性染料染色细胞;

8.用流式细胞染色缓冲液(或PBS)重悬细胞;

9.利用流式细胞仪分析细胞。

10X PBS

1000 ml

KH2PO4

2.4 g

NaH2PO4·12H2O

37.2 g

NaCl

80 g

KCL

2 g

ddH2O

1000 ml

pH

7.2-7.4


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