IHC

免疫化学（ Immunochemistry），包含免疫组织化学（ Immunohistochemistry， IHC）和免疫细胞化学（ Immunocytochemistry， ICC），是利用抗原与抗体之间的结合具有高度特异性的原理，通过抗原抗体结合及呈色反应，显示组织或细胞中的化学成分，对组织切片或细胞标本中某些化学成分进行定性、定位或者定量研究。 

1、脱蜡：

在二甲苯（Ⅰ）中20min，在二甲苯（Ⅱ）中20min; 在无水乙醇（Ⅰ）和（Ⅱ）中各浸泡5min; 95%乙醇中浸泡5min; 80%乙醇中浸泡5min; 60%乙醇中浸泡5min; 单蒸水或去离子水中浸洗3次，每次1min。

2、抗原修复：

取一定量的柠檬酸修复液或 Tris-EDTA修复液于一耐高温容器里，将切片放入其中，再将容器放进微波炉中，power5或中火加热10min。

或者是在烧杯中加入一定量修复液于电炉上加热至沸腾，将切片置于切片架上放入加热的修复液中继续煮沸15min。完毕，放在室温自然冷却，30-40min后，降至室温。

3、免疫组织化学染色：

3.1、取出切片，在单蒸水或去离子水中浸洗3次，每次1min；

3.2、洗净后，将切片浸入装有3%双氧水溶液的容器中，盖上盖子，室温密闭下，浸泡10min；

3.3、取出切片，在单蒸水或去离子水中浸洗3次，每次1min；

3.4、甩干，擦净，滴加适量3%BSA，室温湿盒封闭1hour；

3.5、用吸水纸吸去多余液体（注意不要干片），滴加适量稀释好的一抗（一抗用抗体稀释液稀释），室温湿盒孵育1hour或4℃过夜;

3.6、1xTBST冲洗4-5次，每次30sec；

3.7 、甩干，擦净，滴加适量二抗，室温湿盒孵育30min；

3.8、1xTBS冲洗4-5次，每次30sec；

3.9、甩干，擦净，滴加适量DAB溶液，2-5min后迅速用单蒸水或去离子水冲洗干净；（DAB工作液现配现用）

3.10、甩干，擦净， 滴加1滴Mayor's苏木精，复染1.5-2min,在TBS溶液中浸泡5-10min；

3.11、取出切片，在单蒸水或去离子水中浸洗3次，每次1min； 

3.12、梯度酒精及二甲苯脱水：分别在60%,80%,95%酒精中浸泡5分钟，再在无水乙醇（Ⅰ）和（Ⅱ）中各浸泡5min，然后在二甲苯（III）和（IV）中各浸泡5分钟；

3.13、从二甲苯（IV）中取出切片，中性树胶封片，镜检。